OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE, ESPERMA Y MANCHAS DE SUPUESTO ORIGEN BIOLÓGICO Y SU POSTERIOR CONSERVACIÓN
Antes de entrar en el tema específico se deben indicar ciertas consideraciones relacionadas con el manejo de evidencias físicas, que todo investigador debe tener en cuenta y los elementos de seguridad que deben utilizarse para proteger las muestras y a/individuo que realiza la tarea de su obtención.
I) Levantar toda evidencia física preferiblemente en exceso y no en defecto.
II) Determinar correctamente los limites de contorno final de una muestra a levantar a fin de no alterar o contaminar la misma.
III) Evitar contaminar la muestra con los instrumentos utilizados para su levantamiento.
IV) Sacar fotos antes de levantar cualquier muestra.
V) Los elementos de seguridad mínimos e indispensables son: guantes de látex, gafas y barbijos.
Muestra de sangre para grupo directo
La misma será recolectada en tubos de plástico con tapa a rosca. La cantidad de muestra a extraer será de, aproximadamente, 10 a 12 ml., con cuatro gotas de cualquier anticoagulante (citrato de sodio, fluoruro de sodio, etc.).
En caso de que con la muestra se requiera también determinación de alcoholemia, el anticoagulante a emplear será fluoruro de sodio en una concentración de 15 mg por ml; además se deberá tener la precaución de que a la muestra de sangre contenida en el tubo no le quede cámara de aire, pues si esto sucediera, se produciría la evaporación de etanol y de tóxicos volátiles.
El tubo de muestra deberá recibirse en el laboratorio con su correspondiente rótulo indicando el nombre y apellido de la persona, acompañando por el acta de extracción sanguínea perfectamente confeccionada.
Las muestras temáticas deberán conservarse a una temperatura de 4 a 5º C (en heladera de uso doméstico), NO se utilizará congelador ni freezer. Para su transporte se preservará dicha temperatura con bidones refrigerantes en cajas de telgopor.
El resultado del levantamiento, en un objeto transportable se llevará seco al laboratorio, evitando dobleces en la zona manchada.
En los casos en que la muestra no sea transportable, el material se levantará mediante la incorporación de solución fisiológica, cuyo producto de maceración será tomado por imbibición en gasa. Las muestras obtenidas por los peritos en rastros deberán ser acompañadas, en la mayoría de los casos, por hisopados o extendidos que serán obtenidas por los médicos.
Ambas formas de muestras, para derivarse al laboratorio, deberán ser envueltas en papel madera, según lo que se especifica en Al). -
TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE Y ORINA PARA LA DETERMINAClON DE TOXICOS
A) Muestras de sangre para determinación de alcohol y tóxicos
Al) Muestras de pacientes vivos: Se deberá obtener un volumen de sangre de, aproximadamente, 15 ml., indicando en el acta de extracción qué es lo que se utiliza como desinfectante de la zona de punción. Por último, se agregará anticoagulante (fluoruro de sodio — 150 mg. para el volumen de sangre antes descrito) teniendo la precaución de mezclar la sangre y el anticoagulante en forma homogénea.
A2) Toma de muestras en cadáveres: Se tratará de obtenerse un volumen de, aproximadamente, 20 ml., usando también como anticoagulante 300 mg. de fluoruro de sodio para el volumen de sangre antes descrito, mezclando ambos en forma homogénea.
A3) En ambos casos, las muestras se recolectarán en tubos de plástico con tapa a rosca y, preferentemente, con precinto de aluminio (tipo antibiótico), teniendo la precaución de que la muestra de sangre contenida no guarde cámara de aire, pues de suceder esto, se producirá la evaporación de etanol y tóxicos volátiles.
Como toda muestra deberá rotularse consignando nombre y apellido; adjuntando acta de extracción sanguínea en la que constarán los siguientes datos. hora de la última libación (si es posible), hora del hecho, hora de la toma de la muestra, peso del individuo y el examen clínico del individuo en el momento de la extracción. Las muestras deberán conservarse a una temperatura de 4º C. Para su transporte, se preservará dicha temperatura mediante bidones refrigerantes en cajas de telgopor.
A) Manchas de sangre
Al) Las ropas y telas con manchas a pericias deben ser enviadas al laboratorio secas y envueltas en papel madera, cada una de ellas por separado (evitar colocar muestras en bolsas de polietileno pues se condensa la humedad y aumenta el peligro de contaminación bacteriana). Estas deberán estar rotuladas, con el número de causa, hecho, Juzgado o UFI de turno, víctima, imputado, dirección del hecho y amplia descripción del lugar donde fue obtenida la muestra.
En caso de que las muestras estén húmedas, se secarán a la sombra o superficies adecuadas, evitando el doblado de las mismas, ya que podrían mancharse partes que en un principio no lo estaban, alterando así el estado original de la muestra.
A2) En caso de telas que no se pudieran retirar, las muestras para enviar al laboratorio se deberán cortar, tratando de que las manchas se encuentren en ambas caras de las mismas. Esto facilitará la tarea del técnico de laboratorio, pues de ésta forma tendrá el cien por ciento de las muestras impregnadas.
A3) Sangre fresca: Si el soporte no fuera absorbente, podrá utilizarse para tomar la muestra una gasa pequeña que, con la ayuda de una pinza, se depositará sobre la mancha, dejando que la muestra hemática sea absorbida y se distribuya por todo el trozo de gasa. Seguidamente, se secará, almacenará y rotulará la muestra, de acuerdo a lo estipulado en Al).
A4) Sangre seca: Para obtener la muestra hemática sobre un soporte no absorbente, se agregará sobre la mancha unas gotas de solución fisiológica, frotando suavemente la misma con la ayuda de una gasa tomada por medio de una pinza. Otra forma de proceder, podrá consistir en raspar la muestra por medio de un bisturí y volcar sobre una gasa las partículas obtenidas, que se envolverán con aquella. En ambos casos se deberá proceder para su envío según lo descripto en .
B) Manchas de semen
El elemento de importancia es el espermatozoide y su observación en forma completa será prueba irrefutable de la presencia de esperma.
Dicha célula es muy labil, siendo habitual que la cabeza se separe de la cola imposibilitando su diagnóstico; de ahí la importancia de los recaudos que se tomen en la obtención de las muestras.
B) Muestras de orina para la determinación de alcohol y/o tóxicos.
Toma de muestra: Previo a la toma de la muestra deberá tenerse en cuenta el hecho de no usar alcohol para limpiar el recipiente pues, lógicamente, el valor obtenido posteriormente en su análisis se vería afectado. Por lo expuesto se recomienda la utilización de frascos estériles.
Las muestras sobre cadáveres se obtendrán evitando, como ya mencionamos, la formación de cámaras de aire entre el contenido y la tapa del recipiente (se recomienda precintar el mismo de modo que no pueda ser abierto hasta el momento de periciarse).
La conservación de la muestra se deberá realizar entre los 4°C y los 5°C en heladera y para su transporte se tendrán en cuenta los recaudos antes mencionados, al igual que la correcta rotulación. -
Toma de muestra de aguas para determinación de examen bacteriológico
Para muestras que se deseen obtener de grifo, debe tenerse en cuenta que el mismo esté conectado a la cañería de alimentación central y no a derivaciones que provenientes de tanques domiciliarios, ablandadores, etc.
La técnica a utilizar consistirá en limpiar la boca del grifo, abrir el mismo, y dejar correr el agua durante 5 minutos. Luego, cerrar y esterilizarlo durante 3 minutos calentándolo con llama de lámpara de alcohol o con un hisopo de algodón o gasa embebida en alcohol. A continuación, abrir nuevamente el grifo y dejar fluir agua durante 10 minutos. A partir de este momento podrá recogerse la muestra en frascos estériles, teniendo la precaución de cerrar inmediatamente el mismo.
Luego se procederá a su rotulación y a la colocación de la muestra en heladera de uso doméstico a la espera de su análisis.
En caso de un grifo en un pozo semisurgente, se procederá a abrir el grifo de agua durante 30 minutos (si se trata de un pozo que se usa en forma continua), en caso de posos que se utilizan muy poco o directamente que no se usan, hacer correr el agua durante 5 horas y luego continuar con los pasos antes descriptos.
Filamentos pilosos
Los filamentos pilosos son indicias de gran importancia, y es frecuente encontrarlos en hechos de violencia, sexuales, intencionales, etc.
Para su envío al laboratorio se deberán recoger en el lugar del hecho por medio de una pinza y colocarlos en un sobre color blanco. En el caso que se envíe ropa con presuntos filamentos pilosos para extraer en el laboratorio, las mismas se manipularán con cuidado evitando realizar dobleces, el transporte de las mismas se hará con envoltura en papel madera y cada prenda por separado. Debe dejarse constancia de que en estos casos es siempre preferible recogerlos, ensobrarlos e indicar de dónde fueron tomados, con el fin de evitar que se extravíen.
En casos donde se debiera extraer filamentos pilosos de la víctima (esto normalmente lo realiza el servicio médico) y si tuviera que realizarlo el perito, estos deberán arrancarse (para obtener el bulbo) y en ningún caso cortarse.
Con respecto a la rotulación, deberá seguirse la regla general, esto es: número de causa, datos del hecho, Juzgado o UF.I., víctima, imputado, dirección del hecho y una amplia descripción del lugar donde fue obtenida la muestra. –
Manchas de tierra en el lugar del hecho
Se necesitan, aproximadamente, 100 gramos de muestra de tierra que debe extraerse de la superficie y no de su parte profunda. Se puede enviar una sola muestra del lugar o varias, dependiendo de las características del terreno.
El envío al laboratorio se puede hacer en bolsas de nylon o en frascos de vidrio rotulados. -
Manchas de tierra
Como premisa fundamental en este tipo de manchas, se deberá separar y aislar cada una de las prendas o calzados en el lugar del hecho, ya que si procedemos a su traslado a lugares diferentes, podrían contaminarse las muestras. Las mismas se enviarán en bolsas de nylon rotuladas. -
Muestras de tierra en vehículos
Las muestras de tierra deberán tomarse de los guardabarros, neumáticos, pedalera, baúl y alfombras. Estas se obtendrán por raspado o bien humedeciendo un paño limpio y para luego frotarlo sobre la superficie de donde se quiere obtener la muestra.
Se remitirán al laboratorio en bolsas de nylon rotuladas.
Rotulaciones
En los casos citados anteriormente, en la rotulación de las muestras se debe mencionar: número de causa, hecho, juzgado o U.F.I. de turno, víctima, imputado, dirección del hecho y amplia descripción del lugar de donde fue obtenida la muestra. -
DERMOTEST
Producido un disparo se proyectan hacia atrás y hacia delante granos de pólvora. En este caso nos interesan los segundos y, para obtenerlos, se procede a realizar un calco parafinico (NO UTILIZAR VELAS) sobre las manos del presunto tirador. El calco deberá ensobrarse procurando evitar dobleces, rotularse y enviarlo al laboratorio.
Otro método para la extracción de granos de pólvora consiste en el uso de una cinta transparente adhesiva. En este caso, la muestra obtenida se deberá adherir a un vidrio limpio, también evitando dobleces y se rotulará debidamente (datos de la causa y mano a la que corresponde la toma).
DETERMINACIÓN DE PLOMO, BARIO Y ANTIMONIO EN ESTUDIO DE RESTOS DE DEFLAGRACION
UTILIZANDO UN ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCIÓN / EMISION ATOMICA
Procedimiento
a) un hisopo de algodón se humedece ligeramente con gotas de una solución de ácido nítrico (tipo Merck p.a) al 5% empleado agua bídestilada y deionizada ya que debe asegurarse la no incorporación de los metales a estudiar por medio de la solución. El hisopo se pasa por aquel sector de la mano comprendida entre los dedos índice y el pulgar
resulta sumamente importante manipular el hisopo con mucho cuidado de modo tal que el mimo entre en contacto exclusivamente con aquel sector de la mano a investigar
b) Una vez obtenida la muestra introducir el hisopo en un tubo de material plástico tapar e identificar claramente. Resulta ideales tubos plástico con tapa a rosca. Los de vidrio no son aconsejables ya que podrían incorporar alguno de los metales.
c) Repetir las operaciones a y b sobre la otra mano.
d) En un tubo vacío colocar un hisopo idéntico a los empleados para obtener la muestra anteriores pero sin humedecer con solución nítrica (blanco de algodón)
e) En otro tubo remitir 5cc de la solución al 5% (blanco de la solución)
f) eventualmente se puede obtener muestras de las palmas de ambas mano procediendo para tal fin de modo similar al detallado precedentemente, colocando los mismos en sendos tubos y cumpliendo con las precauciones ya indicadas. Este tipo de muestra es aconsejable en aquellos casos de homicidio en los cuales se sospecha maniobras de autodefensa de la víctima.
g) Resulta de suma utilidad para el análisis acompañar el pedido de pericia de la siguiente información complementaria: fecha y hora del hecho y de la obtención la muestras ; arma empleada (marca ,calibre y de ser posible estado de la misma) munición utilizada, numero de disparo efectuados, ocupación de quien disparo y mano con la cual lo realizo; remisión de al menos, una cápsula o bien cartucho intacto a fin de analizar la composición del detonante. También resulta de interés todo aquellos datos atinentes al tratamiento previo de las manos como por ejemplo , si las mismas fueron lavadas, obtención de huellas dactilares etc., siendo importante también el estado de las mismas al momento de ser colectadas las muestras (por ejemplo si poseen restos térreos. Etc.)
Levantamiento de muestras de vidrio
Cuando se rompe un vidrio por la acción de un golpe, pequeños fragmentos son expulsados hacia ambos lados y en todas direcciones, recorriendo una distancia apreciable. Estos pueden incrustarse o adherirse a la ropa del autor del hecho, de ahí la importancia de recoger los que se pudieran encontrar en la ropa con el fin de confrontarlos con los hallados en e/lugar de los hechos.
Cuando el perito debe tomar las muestras del lugar del hecho, el mismo deberá asegurarse de obtener la mayor cantidad posible de ellas, evitando roturas posteriores, para lo cual, realizará un buen embalaje. Estas precauciones permitirán el ensayo de yuxtaposición con vidrios agregados posteriormente a la causa, cuya perfecta coincidencia, constituirá una importante prueba sobre el origen común de unos y otros.
LEVANTAMINTO DE MUESTRAS DE PINTURA PARA ANÁLISIS POR
ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA
El mismo reviste gran importancia tanto en el examen físico como químico de los rastros de pintura que puedan encontrase en accidentes de tránsito, especialmente cuando uno de los móviles se ha dado a la fuga. En tales casos no solamente adquiere importancia la composición química de la pintura sino, además, el color, espesor y el orden de sucesión de las posibles capas existentes.
Otras pruebas importantes, como pequeñas manchas sobre la ropa o las herramientas del sospechoso, pueden levantarse por raspado con el fin de obtener los trozos del mayor tamaño posible.
METODOLOGIAARA ELEVANTAMIENTO DE RODADOSDe cada uno de los rodados involucrados tomar un trozo de muestra conteniendo pintura intacta de un mínimo de 3 cm por 3 cm de la superficie de contacto entre los dos rodados, siempre que sea factible , de lo contrario una muestra lo más abundante posible obtenida por raspado
MUROS, POSTES, PUERTAS Y VENTANAS
Un trozo de muestra conteniendo pintura intacta como mínimo 3 cm por 3 cm
OTROS ELEMENTOS (varillas, martillos etc.)
De ser posible, debe remitirse el elemento completo y protegido en la zona de interés mediante un papel limpio, nunca mediante cinta adhesiva, para evitar la adhesión de la muestra.
De no ser posible su remisión, una muestra lo más abundante posible obtenida por raspado
RECIPIENTE PARA LA TOMA DE lA MUESTRA
Se recomienda la utilización de recipientes que puedan cerrar en forma hermetica, tales como tubos, sobres bien cerrados y reforzando las uniones
MUESTRAS DE FIBRAS PARA EL ANÁLISIS POR ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA
Siempre que sea factible, debe enviarse la prenda, alfombra. Etc. en su totalidad en caso contrario un trozo de la misma, que incluya toda la gama de colores y tramado. la misma debe remitirse seca y en sobre de papel o en bolsa de nylon, herméticamente cerrada Cuando la muestra consiste en una o varias hebras, estas deben envasarse en un tobo plástico con cierre hermético, limpio y seco
LEVANTAMIENTO DE MUESTRAS DE COMBUSTIBLE PARA ANÁLISIS POR ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA
Recipiente para la toma de muestras
Se recomienda la utilización de recipientes de vidrio, de boca ancha y tapa a rosca, de tamaño compatible con la muestra levantada, teniendo en cuenta que su tapa no debe estar forrada de parte pegadas ni tener juntas de goma, ya que las mismas pueden producir la contaminación de las muestras. por esto último se recomienda
Colocar siempre un trozo de papel de aluminio entre la tapa y el frasco, tomado la precaución necesaria para que el mismo no se rompa durante el cierre del envase.
Si existen pruebas cuyo tamaño imposibilita la utilización de frascos de vidrio pueden utilización otros tipo de envase, como ser latas sin ningún tipo de recubrimiento interior o bolsas de plástico. Dejando constancia que solamente debe recurrirse a este tipo de envase cuando el tamaño de las muestras supere la capacidad de los frascos de vidrio y no exista posibilidad de fragmentar la muestra, ya que se corre el riesgo de contaminación con productos propios del envase
METODOLOGÍA PARA SU LEVANTAMIENTO
Pruebas liquidas
Los materiales líquidos derramados deben recogerse atizando jeringas, pipetas, goteros o el propio recipiente de vidrio. Debe llenarse dos tercios del envase dejando espacio suficiente para posibles evaporaciones.
Si se trata de material líquido que se encuentre en su envase original, remitirlo en el mismo. De no ser factible su remisión en el recipiente , por encontrase deteriorado el mimo o su tapa, o por su tamaño, se trasvasará una porción a los frascos mencionados.
Pruebas sólidas
Los combustibles sólidos deben conservarse en el estado que se encontraron remitiéndose en se envase original. De no ser factible esto, se colocara en frasco de vidrio para su remisión al laboratorio.
Los materiales transportables como trapos, alfombras, tierra , etc. se colocan en los recipientes de vidrio para su remisión.
Si trata de material no transportable como piso de madera, recubrimiento. Etc. debe de obtenerse una muestra representativa de la misma de la misma, ya sea por raspado o seccionado, la cual se colocar en los recipientes de vidrio.
En el caso de pruebas cuyo tamaño imposibilite su traslado como ser alfombra , sillones etc. se tomaran las muestras cuyas características organolépticas hagan presumir la presencia de algún acelerante.
Siempre que sea posible, cuando se trate de material empapado en líquido (como ser goma espuma), se escurrirá la mayor cantidad de liquido en el interior de un frasco para evitar que el contacto con el acelerante disuelva otras sustancias del material que no son de interés. Cuando se tomen muestras con éste procedimiento debe tenerse la precaución de aclarar el rótulo de la misma cual fue su origen.
ENVASADO Las muestras levantadas deben ser introducidas en el frasco , el cual debe cerrarse inmediatamente para evitar las pérdidas por evaporación y no debe ser abierto hasta el momento de la realización de la pericia el laboratorio.
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BENEFICIOS DE LA TIPIFICACION DEL A.D.N
• Analiza directamente el material genético del individuo.
• Utiliza fundamentos y procedimientos de rutina para diagnóstico médico y mapeo genético.
• Resistencia de la molécula de A.D.N. al paso del tiempo y a las injurias ambientales.
• Requiere mínimas cantidades de muestra biológica.
• Permite aclarar la situación de inocentes falsamente acusados.
• Permite aseverar, con altísima probabilidad, la responsabilidad de un acusado verdadero.
UTILIDAD DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ADN
La utilidad de una muestra biológica para tipificar el ADN depende:
1. Selección adecuada del caso.
2. Recolección cuidadosa de la Muestra debiéndose evitar su:
• Contaminación con células del técnico instructor o sus auxiliares; con material de otras muestras.
• Descomposición y Degradación de la muestra por: manipulación con material mal preparado, envase en recipientes inadecuados, conservación a temperaturas que favorecen el crecimiento de bacterias y hongos, fijación en soluciones que alteran químicamente el ADN, retraso y/o condiciones defectuosas en el traslado de las muestras al laboratorio de análisis.
3. Validez de los Resultados por:
• Aplicación de condiciones de “Garantía de Ley” en la recolección, conservación y traslado de las muestras al laboratorio de análisis.
• Realización de los análisis en Laboratorios acreditados y por profesionales idóneos en Biología molecular, Genética y Medicina legal cuya competencia esté reconocida por publicaciones, exposición en eventos internacionales, participación en ejercicios de control de calidad, dirección y formación de recursos humanos.
RECOLECCION DE MUESTRAS PARA TIPIFICAR ADN CONDICIONES GENERALES
4. Toda muestra biológica para tipificación de ADN debe tomarse con guantes de goma o latex nuevos
5. Envasarse en frascos, tubos, cajas, sobres u otros recipientes nuevos o limpios y estériles
6. Manipularse con pinzas, sondas, tijeras, bisturíes, hisopos u otros elementos estériles
7. Cada muestra debe colocarse en recipientes individuales
8. Cada envase debe rotularse y lacrarse inmediatamente de colocar la muestra.
9. Inmediatamente de recolectada y hasta su envío al laboratorio de análisis cada muestra para ADN debe almacenarse a baja temperatura (en freezer a — 20 ° C, congelador a 00 C, heladera a 40 C)
CONDICIONES PARTICULARES
• Sangre fresca extraer con jeringa y aguja nuevas descartables con anticoagulante
(citrato); envasar en tubo o frasco nuevo estéril y conservar en freezer hasta su
envío al laboratorio. Si se trata de niños pequeños punzar el talón y recoger unas 4
o 5 gotas en papel de filtro FTA (provisto por el laboratorio)
• Sangre coagulada envasar en tubo o frasco nuevo estéril y conservar en freezer
• Sangre seca raspar con bisturí estéril o Gillette nueva, envasar en tubo nuevo estéril y conservar en freezer
• Mancha de sangre o semen en ropas utilizar hisopos comerciales, estériles, secos, envasados en tubos sin conservantes ni medio de cultivo. Conservar, indefectiblemente, en freezer o heladera hasta su envío al laboratorio
• Pelos de cabeza, pubis, torso, brazos, con raíz, deben envasarse en tubos, cajas o sobres nuevos; si previamente fueron analizados por microscopia enviarlos montados sobre el portaobjetos.
• Dientes con raíz, sin caries ni amalgamas; envasadas en frascos con alcohol al
80%.
• Tejidos blandos extraer con tijeras y pinzas estériles un trozo de corazón, hígado, riñón, músculo, envasar individualmente en frascos nuevos o estériles con alcohol al 80%; conservar en heladera. Si se trata de cadáveres en descomposición extraer trozos de corazón . Envasar del mismo modo y conservar en freezer.
• Hueso Cortar 10 cm. de diáfisis de hueso largo (fémur, húmero o tibia), recolectar 1 —2 falanges, 1-2 vértebras dorsales sin partes blandas. Si se trata de recién nacidos o niños pequeños exhumados luego de uno o dos años de fallecidos enviar todos los huesos largos, vértebras, huesos del cráneo especialmente el temporal. En todos los casos colocar los huesos en frascos con alcohol al 80% y conservar en freezer hasta su envío al laboratorio.
• Colillas de cigarrillos estampillas, sobres: se levantan con mano enguantada y
• pinza estéril y se colocan en sobres o cajas de cartón o plástico nuevos.-
